王硕敏,胡一凡,周炳贤,范世恒,吴祺晟,范雅妍,卢春芸,于德娥,张静
摘要:
目的 基于ROS/NLRP3信号通路探讨烟草烟雾暴露所致Sertoli-生精细胞损伤的作用机制。方法 体外培养大鼠Sertoli-生精细胞，分为对照组(A组)、烟草烟雾提取物(CSE)处理组(B组)和CSE+NLRP3炎症小体抑制剂MCC950组(C组)。CCK-8法检测细胞存活率，乳酸脱氢酶(LDH)判断细胞膜受损情况，活性氧(ROS)判断氧化应激水平，Hoechst/PI双染检测细胞焦亡水平，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)mRNA表达水平，Western blot检测细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18蛋白表达水平。结果 CSE组Sertoli-生精细胞存活率显著下降(P<0.001),LDH漏出率显著增加(P<0.001),ROS生成显著增加(P<0.001);与CSE组比较，CSE+MCC950组Sertoli-生精细胞存活率升高(P<0.001),LDH漏出率降低(P<0.01),ROS生成显著降低(P<0.001)。对照组Sertoli-生精细胞仅见少量PI染色细胞，CSE组PI染色细胞明显增多，CSE+MCC950组PI染色细胞数量低于CSE组。RT-qPCR和Western blot结果显示，CSE组NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白质表达水平均显著升高(P<0.001),CSE+MCC950组表达水平均显著降低(P<0.01)。结论 烟草烟雾暴可导致Sertoli-生精细胞氧化应激和损伤，其机制可能与ROS/NLRP3信号通路激活有关。
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