邱军辉;刘美志;孙杜桑;潘婷;赵维维;沙雯君;鲁郡;雷涛;
摘要:
目的研究糖化低密度脂蛋白(Gly-LDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的炎症损伤及Toll样受体4(TLR4)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响，并探讨其可能的机制。方法体外培养HUVECs,实验分为对照组、阳性对照组[50 mg/L普通低密度脂蛋白(n-LDL)]、Gly-LDL(50、75、100 mg/L)组。CCK-8法测定细胞增殖情况；划痕实验测定细胞迁移能力；ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)分泌水平；qRT-PCR测定TLR4、HIF-1α、TNF-α、IL-6 mRNA水平；Western blot测定TLR4、HIF-1α、TNF-α、IL-6蛋白水平；分别用TLR4、HIF-1α的si-RNA干预Gly-LDL对HUVECs的作用，实验分为对照组、模型组(Gly-LDL 100 mg/L)、si-TLR4组(Gly-LDL 100 mg/L+si-TLR4)、TLR4空载组(Gly-LDL 100 mg/L+si-NC1)、si-HIF-1α组(Gly-LDL 100 mg/L+si-HIF-1α)和HIF-1α空载组(Gly-LDL 100 mg/L+si-NC2)。Western blot法检测TLR4、HIF-1α蛋白表达水平，验证TLR4、HIF-1α相互作用关系。结果Gly-LDL (50、75、100 mg/L)组均可抑制HUVECs的增殖及迁移能力(P<0.01),刺激HUVECs中炎症细胞因子TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1分泌量增加(P<0.001),上调TLR4、HIF-1α、TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白水平(P<0.05),并呈浓度依赖性。敲除TLR4后，与模型组相比，TLR4、HIF-1α蛋白表达均下调(P<0.001)。敲除HIF-1α后，与模型组相比，仅HIF-1α蛋白表达下调(P<0.001),而TLR4蛋白在Gly-LDL作用下表达上调。结论Gly-LDL可能通过上调TLR4/HIF-1α炎症信号通路抑制HUVECs的增殖与迁移，上调炎症细胞因子表达，导致血管内皮损伤。
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