金娟;魏伟;
摘要:
目的观察肝细胞癌(HCC)患者血清中前列腺素E2(PGE2)水平及前列腺素E受体(EP1)在HCC细胞和人肝细胞中的表达,分析PGE2及EP1激动剂ONO-DI-004对HCC增殖和移行的相关性,研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对PGE2或ONO-DI-004刺激的HCC的抑制作用及对HCC细胞周期、凋亡、PGE2、EP1和Bcl-2表达的影响,初步探讨EGCG抗HCC的作用靶点和机制。方法HepG2细胞设置组别为:对照组、PGE2(0、4、40、400、4 000、40 000 nmol/L)组、EGCG(12.5、25、50、100μg/ml)组、PGE2(4、40、400、4 000)+EGCG(100μg/ml)组、ONO-DI-004(4、40、400、4 000nmol/L)组、ONO-DI-004+EGCG(100μg/ml)组、ONO-8711(210 nmol/L,1、5、10μmol/L)组。MTT法检测HepG2的增殖;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测HepG2的移行;Western blot法和免疫荧光实验检测HepG2中EP1、Gq和Bcl-2蛋白的表达;酶联免疫分析法检测HCC患者血清PGE2及HepG2产生PGE2和血管内皮生长因子(VEGF)的水平;流式细胞技术检测HepG2细胞周期和凋亡。结果与正常志愿者血清中的PGE2水平比较,HCC患者的血浆中PGE2的水平呈高表达。与对照组相比,EGCG(12.5、25、50、100μg/ml)显著降低HepG2中PGE2和VEGF水平。EP1在肝癌细胞株MHCC-97L和HepG2中的表达明显高于在人肝细胞株L02中的表达。EGCG(100μg/ml)能显著抑制EP1受体以及ONO-DI-004诱导的Bcl-2的表达(P<0.01)。观察EGCG(12.5、25、50、100μg/ml)作用于HepG2后对细胞的增殖作用,100μg/mlEGCG对HepG2作用24 h后可显著抑制HepG2的生长(P<0.01),细胞的平均抑制率为41%。24 h的药物浓度与抑制率具有相关性(r=0.8,P=0.02)。EGCG对HepG2具有显著抑制作用。细胞划痕实验和Transwell侵袭实验观察PGE2(4μmol/L)和ONO-DI-004(400 nmol/L)刺激后,HepG2移行较对照组明显增加,EGCG和ONO-8711均能显著抑制HepG2移行,且给予EGCG(100μg/ml)后可显著降低PGE2和ONO-DI-004刺激的HepG2的移行(P<0.01)。流式细胞术检测细胞凋亡率,HepG2经ONO-DI-004(400 nmol/L)、PGE2(4μmol/L)、EGCG(100μg/ml)、EGCG(100μg/ml)+ONO-DI-004(400 nmol/L)以及EGCG(100μg/mL)+PGE2(4μmol/L)作用24 h,对照组的细胞凋亡率为(2.36±2.51)%,EGCG(100μg/ml)处理组的凋亡率为(16.8±1.73)%,EGCG(100μg/ml)处理组与对照组的细胞凋亡率相比差异有显著性(P<0.01)。ONO-DI-004(400 nmol/L)处理组的凋亡率为(0.6±1.86)%,EGCG(100μg/ml)+ONO-DI-004(400 nmol/L)处理组的凋亡率为(12.25±2.64)%,两组间的差异具有显著性(P<0.01)。EGCG(100μg/ml)可显著诱导HepG2细胞的凋亡,对PGE2、ONO-DI-004刺激的HepG2细胞也有明显的促凋亡作用。结论①HCC患者血清中PGE2表达异常升高,提示PGE2在HCC患者中发挥重要作用;②HCC细胞株中EP1表达较正常肝细胞异常升高,PGE2可能通过EP1发挥促HCC作用;③EGCG呈浓度依赖性抑制由PGE2和ONO-DI-004刺激引起的HepG2的增殖和转移,抑制HCC异常增殖、移行、细胞周期,诱导凋亡是EGCG的重要作用;④EGCG抑制HepG2产生VEGF和PGE2,降低EP1及ONO-DI-004刺激的Bcl-2的表达,但对Gq蛋白的表达没有影响,降低PGE2和VEGF水平、下调EP1和Bcl-2的表达是EGCG抑制HCC增殖和移行、诱导凋亡的重要机制之一。
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