基金项目: 国家自然科学基金青年科学基金项目(编号:81701278);;湖北省卫生计生委科研项目(编号:WJ2019M063);;宜昌市卫生医疗科技项目(编号:A18-301-29)
作者:刘彦廷;孙拯;王壮壮;龚伟;马金阳;田春雷;
关键词:外泌体;;胶质瘤;;凋亡;;增殖
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.09.004
〔摘 要〕 目的 探索胶质瘤细胞来源的外泌体对细胞增殖凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法高速离心法提取胶质瘤细胞U251外泌体,通过电镜及纳米粒径分析外泌体形态,Western blot检测外泌体特征性蛋白表达。在U251细胞培养基中分别加入浓度为100μg/ml的外泌体悬液30μl(外泌体组)或等量不含外泌体培养基(对照组),通过双荧光染色法验证外泌体能否进入U251细胞;CCK-8及流式细胞法检测细胞增殖凋亡的变化。通过RT-PCR法筛选U251外泌体与人星型胶质细胞外泌体中差异性表达的miRNAs。最后,将miR-NC、miR-125b mimics或miR-125b inhibitor转染U251细胞,重新提取外泌体后加入细胞培养基,采用CCK-8及流式细胞法检测U251细胞增殖凋亡变化。结果U251细胞分离的外泌体为圆形或卵圆形囊泡状小体,直径范围约100 nm,富含CD63和CD9蛋白。在U251细胞培养基中加入外泌体悬液后,外泌体能够被U251细胞吞噬。CCK-8及流式细胞法显示:外泌体组细胞增殖活性高于对照组,凋亡比例低于对照组。RT-PCR显示:U251细胞外泌体miRNA-125b含量高于人星型胶质细胞外泌体。将miR-NC、miR-125b mimics或miR-125b inhibitor转染U251细胞后,分别提取三组细胞外泌体并加入U251细胞培养基,miR-125b inhibitor组细胞增殖活性低于miR-NC组,凋亡比例高于miR-NC组;miR-125b mimics组细胞增殖活性高于miR-NC组,凋亡比例低于miR-NC组。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胶质瘤细胞来源的外泌体可通过miR-125b,促进胶质瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡。