基金项目: 国家自然科学青年基金(编号:81603138);;安徽省中央引导地方科技发展专项项目(编号:2017070802D149);;安徽省高校优秀拔尖人才培育项目(编号:gxgwfx2019006)
作者:江玉;孙磊;张英;陈颍;张晓慧;颜士杰;肖兰;
关键词:肿瘤相关成纤维细胞;;上皮性卵巢癌;;分离;;YAP;;顺铂耐药
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.02.016
〔摘 要〕 目的 探讨卵巢癌相关成纤维细胞(CAFs)对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其可能作用机制。方法 收取上皮性卵巢癌及正常卵巢上皮组织各10例,分离纯化培养CAFs和正常卵巢成纤维细胞(NFs),免疫荧光法鉴定CAFs;收集CAFs或NFs培养上清液与卵巢癌SKOV3细胞建立间接共培养体系;CCK8法检测细胞增殖及顺铂毒性、划痕实验检测细胞迁移能力;DCFH-DA法测定共培养体系中活性氧(ROS)含量;qPCR及Western blot法检测共培养体系SKOV3细胞耐药相关基因YAP、CTGF和Cyr61在mRNA及蛋白水平表达。结果 成功分离培养CAFs或NFs,免疫荧光结果显示CAFs中平滑肌激动蛋白-α(α-SMA)与成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达阳性;SKOV3细胞与CAFs间接共培养后其增殖能力(P<0.001)、顺铂半数抑制浓度(IC50)(P<0.01)、迁移能力(P<0.01)均较SKOV3细胞单独培养或与NFs共培养组增加,差异有统计学意义;CAFs共培养体系细胞中ROS含量增加(P<0.01),差异有统计学意义;CAFs共培养SKOV3细胞中耐药相关基因YAP(P<0.01)、CTGF(P<0.05)、Cyr61(P<0.01)在mRNA及蛋白水平较单独培养或与NFs共培养SKOV3中表达升高,差异有统计学意义。结论 CAFs可促进SKOV3细胞增殖、迁移,降低SKOV3细胞对顺铂敏感性。其机制一方面可能与ROS促进SKOV3细胞自噬相关;另一方面与卵巢癌细胞中耐药基因YAP、CTGF及Cyr61表达上调有关。