安徽医科大学学报
2020 06 v.55 974-978
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基金项目: 安徽省自然科学基金(编号:1508085MH156)
作者：顾前程;夏荣;孔文文;
关键词：牙龈卟啉单胞菌;;Ltp1(PG1641);;蛋白表达纯化;;牙周病;;酶学研究
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.06.030
〔摘 要〕 采用重组法构建Ltp1的原核表达载体,并将其转化至E.coli BL21(DE3)中进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导过表达,然后用镍柱层析法粗纯化,分子筛细纯化得到目的蛋白,以SDS-PAGE电泳和Western blot分析表达产物;将目的蛋白和底物对硝基苯磷酸二钠显色反应分析其活性。SDS-PAGE结果显示有与目的蛋白理论相对分子质量一致的表达条带;Western blot分析证实该蛋白带有6个组氨酸(His)标签的目的蛋白,能够催化磷酸单酯的活性;计算出米氏常数(Km)和最大反应速率(Vmax)分别为70.4μmol、51.1μmol/(L·min),pH 5.0～6.0催化活性最高,在37～50℃具有较高活性。