〔摘　要〕 目的构建Luk S-PV与GFP融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中表达纯化并鉴定。方法煮沸法提取金黄色葡萄球菌铜23的DNA作为模板,PCR扩增得到Luk S-PV基因产物,经胶回收后与p MD-18T质粒连接过夜后转化至感受态菌DH5α中。提取质粒经PCR、测序鉴定无误,双酶切后连接到pet28a-N6H-GFP载体上,先转化至感受态菌DH5α再转化到BL21宿主菌中。对Luk S-PV-GFP表达产物使用SDS-PAGE电泳分析,并取诱导前和IPTG诱导5 h菌液涂片置于荧光显微镜下观察。使用Western blot对诱导前及纯化后蛋白进行鉴定。结果成功构建了Luk S-PV与GFP融合蛋白表达载体,诱导纯化后获得较高浓度和纯度的重组融合蛋白,且诱导前无荧光,诱导后宿主菌BL21可在荧光显微镜下显示绿色荧光。Western blot结果显示纯化后蛋白出现特异性条带。结论成功地纯化得到了具有生物学活性的Luk S-PV-GFP重组融合蛋白,为进一步研究Luk S-PV的功能定位和相互作用奠定了基础。