基金项目: 国家“重大新药创制”科技重大专项(编号:2008ZX09203-003)
作者:王参军;邹文艺;张玲;范清林;宋礼华;
关键词:突变;;干扰素-α2b;;基因表达;;大肠杆菌
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2010.02.005
〔摘 要〕 目的对人干扰素-α2b(hIFN-α2b)基因的5′端进行突变,构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核高表达工程菌,以提高rhIFN-α2b的表达水平。方法依据大肠杆菌密码子偏好性,在不改变hIFN-α2b的氨基酸序列的情况下,定点突变hIFN-α2b基因5′端序列并PCR扩增出rhIFN-α2b′,克隆至温控型表达载体pJW2,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子,温度诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot鉴定分析并以WISH-VSV系统检测其抗病毒活性。结果SDS-PAGE分析表明rhIFN-α2b表达量约占菌体总蛋白20.6%,Western blot表明rhIFN-α2b具有与hIFN-α2b相同的免疫原性,WISH细胞-VSV病毒系统证实其比活性达1.2×108IU/mg,与未突变工程菌一致。结论突变hIFN-α2b基因5′端可以提高其表达水平,并成功构建出rhIFN-α2b原核高表达工程菌。