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可表达骨形态发生蛋白-4的真核表达载体的构建与鉴定

安徽医科大学学报 2006 03 270-272     字体:

基金项目: 安徽省科技厅自然科学基金资助项目(编号:03023056)

作者:王兴宇;汪春兰;李栋梁;赵宇;王帮河;何金生;

关键词:骨形态发生蛋白质类;;基因表达

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2006.03.011

〔摘 要〕 目的构建含有骨形态发生蛋白(hBMP)-4的真核表达载体pcDNA3·1(+)/hBMP-4。方法将质粒pCS2(+)/hBMP-4用EcoRⅠ单酶双切获得目的基因片段,真核载体pcDNA3·1(+)用EcoRⅠ酶切线性化,对上述两种酶切产物分别回收纯化后进行连接,筛选出正确的转化子,并进一步转染COS-7细胞,提取总RNA和总蛋白,进行RT-PCR和Western-blot检测。结果获得了含有目的基因片段的真核表达载体,酶切及基因测序提示构建正确,RT-PCR检测到目的基因的转录,Western-blot检测到hBMP-4蛋白表达。结论利用非定向克隆技术将目的基因转移至真核表达载体中,为进一步研究目的基因打下基础。