基金项目: 国家自然科学基金项目(编号:82003795);
作者:刘文辉;洪文明;陈佳星;萨日娜;刘娟;张晓丽;
关键词:M2巨噬细胞;胶质母瘤;TNFSF13;IRF8;替莫唑胺;耐药;
DOI:DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2024.11.007
〔摘 要〕 目的 探讨M2巨噬细胞来源的肿瘤坏死因子配体超家族成员13(TNFSF13)通过调控干扰素调节因子8(IRF8)对胶质母瘤(GBM)细胞替莫唑胺(TMZ)耐药的影响。方法 免疫组织化学法(IHC)检测正常脑组织和GBM组织中TNFSF13的表达,ELISA检测M0型巨噬细胞和M2型巨噬细胞条件培养基(CM)中TNFSF13的表达。M0-CM和M2-CM用于培养U251敏感(U251/S)细胞和U251耐药(U251/R)细胞。TMZ处理组同时加入800μmol/L的TMZ。U251/R细胞分为如下组:con组、M2vector-CM组、M2vector-CM+TMZ组、M2TNFSF13-CM组、M2TNFSF13-CM+TMZ组、si-IRF8组、si-IRF8+M2TNFSF13-CM组。CCK-8检测细胞活力并计算IC50值,Transwell实验检测细胞侵袭,流式细胞术检测凋亡,Western blot检测IRF8的表达。构建裸鼠移植瘤模型并且将裸鼠分为如下组:U251+M2si-NC组、U251+M2si-TNFSF13组、U251+M2si-NC+TMZ组、U251+M2si-TNFSF13+TMZ组。检测各组成瘤体积和质量,免疫组化检测各组肿瘤组织中TNFSF13和CD206的表达。结果 与癌旁组织以及M0-CM比较,癌组织以及M2-CM中TNFSF13的表达上调。与M0-CM组相比,M2-CM组中U251/S和U251/R细胞TMZ的IC50值和细胞侵袭数目均显著上调(均P <0.05)。在M2巨噬细胞中过表达TNFSF13能够促进U251/R细胞TMZ的IC50值,促进细胞侵袭、抑制细胞凋亡(均P<0.05)。过表达TNFSF13促进IRF8的表达,敲低IRF8能够减弱过表达TINFSF13介导的U251/R对TMZ耐药。体内研究显示,敲低TNFSF13与TMZ单独或联合处理显著抑制肿瘤生长、降低TNFSF13和CD206的表达。结论M2巨噬细胞来源的TNFSF13通过激活IRF8促进GBM细胞TMZ耐药。