基金项目: 辽宁省教育厅科学技术研究项目(编号:JYTJCZR2020062);
作者:杜明珠;张斌;
关键词:E2F1;舌鳞癌;增殖;迁移;侵袭;凋亡;EMT;WNT;
DOI:DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2024.12.009
〔摘 要〕 目的 在人舌鳞癌细胞中敲低E2F转录因子1(E2F1),探究其对舌鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探索其可能的作用机制。方法 RT-PCR检测人舌鳞癌组织及癌旁组织样本中E2F1表达。RT-PCR检测人口腔上皮细胞HOEC和人舌鳞癌细胞SCC-9、CAL-27、TSCCa和SCC-25细胞中E2F1基因的本底表达,筛选E2F1显著高表达的细胞株进行后续实验。在舌鳞癌候选细胞中敲低E2F1基因后利用CCK-8、EdU、克隆形成、细胞划痕、Transwell、细胞凋亡和细胞周期实验检测敲低E2F1对人舌鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。Western blot检测上皮间充质转化(EMT)标志物钙粘蛋白E(E-cadherin)、钙粘蛋白N(N-cadherin)和蜗牛家族转录抑制因子1(Snail)蛋白及WNT信号通路标志物WNT家族成员3A(WNT3A)、β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期蛋白D1(CCND1)表达变化。结果RT-PCR结果显示,相比癌旁组织,E2F1在癌组织中表达明显升高(P <0.001);同时相比HOEC细胞,E2F1在SCC-9、CAL-27、TSCCa和SCC-25细胞中表达均明显升高(P <0.05),而在SCC-25细胞中高表达最为明显,因此,后续实验使用SCC-25作为实验细胞株。SCC-25细胞中敲低E2F1后,CCK-8细胞存活能力明显被抑制(P<0.001);EdU阳性细胞数、细胞克隆成球数明显减少(P<0.001);细胞总凋亡比例明显升高(P<0.001);细胞处于G1期细胞比例增多(P <0.01),相反处于G2期细胞比例减少(P <0.01);细胞迁移和侵袭能力均明显被抑制(P<0.001);WNT信号通路蛋白WNT3A、β-catenin和CCND1蛋白表达降低(P<0.001),同时EMT相关蛋白N-cadherin和Snail蛋白表达降低(P<0.001),而E-cadherin蛋白表达升高(P<0.001)。结论 敲低E2F1抑制人舌鳞癌SCC-25细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT过程,同时促进细胞凋亡,这种抑癌作用可能是通过阻断WNT信号通路的激活而实现。