基金项目: 国家自然科学基金(编号：31660258);;贵州省科学技术基金(编号：黔科合支撑[2019]2787号；黔科合平台人才[2016]5676);;国家级大学生创新创业训练项目(编号：202010660035)
作者：刘江丽;李盈盈;王佳雯;许喻鈞;张艳;黄江涛;胡祖权;曾柱;
关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2;;核衣壳蛋白;;单克隆抗体;;免疫学检测
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.03.017
〔摘 要〕 目的 制备针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAbs)并鉴定其生物学特性。方法 利用大肠杆菌原核表达重组SARS-CoV-2 N蛋白，通过杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经重组蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合，采用间接ELISA法和有限稀释法筛选出阳性杂交瘤细胞株，并鉴定其亚型，腹水法制备mAbs, Protein G亲和柱纯化后通过SDS-PAGE、间接ELISA和Western blot检测其纯度、效价及特异性。结果 获得5株能稳定分泌抗SARS-CoV-2 N蛋白mAbs的杂交瘤细胞株，分别命名为N1～5。通过腹水法制备获得5个mAbs，亚型鉴定结果显示1个为IgG2a*κ型、4个为IgG1*κ型，其效价均达到2×104以上。Western blot结果表明5个mAbs都能与重组SARS-CoV-2 N蛋白结合。结论通过杂交瘤技术成功制备了5个能特异性识别重组SARS-CoV-2 N蛋白的mAbs，为开发免疫诊断试剂奠定了基础。