安徽医科大学学报
2022 02 v.57 182-186
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基金项目: 国家自然科学基金(编号：81960222);;石河子大学国际科技合作促进计划(编号：GJHZ201704);;兵团财政科技计划项目(编号：2020CB011)
作者：张磊;戴朝;韩延峰;李阳;胡玉奇;陈富雷;赵冬;
关键词：皮质神经元细胞;;自噬;;自噬流;;OGD/R;;检测
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.02.004
〔摘 要〕 目的用几种高度精细灵敏的方法检测氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后神经元自噬流不同阶段的变化。方法原代皮质神经元细胞经过OGD/R后将实验分为OGD/R组及OGD/R+bafilomycin A1 (BafA1)组,用RFP-GFP串联荧光标记LC3基因转染检测自噬小体和溶酶体的融合情况,透射电子显微镜(TEM)观察自噬的超微结构,SQSTM1/p62结合LC3蛋白翻转实验检测p62与LC3蛋白的定量,p62免疫染色观测其分布与含量。结果荧光显微镜下OGD/R组自噬溶酶体与自噬小体比值明显增高;TEM可观测到不同阶段的自噬结构变化;可溶性p62的比值结合LC3Ⅱ/Ⅰ的比值共同反映了自噬流的活化;p62荧光染色后在BafA1组中分布居多。结论每种方法各有其优点,不同方法和指标能够精准地反映神经元OGD/R后自噬流在不同阶段的具体变化,掌握并应用好这些方法能有效从自噬角度探索中枢神经系统疾病。