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miR-9通过调控β-tubulin Ⅲ、GFAP对神经干细胞增殖的影响

安徽医科大学学报 2022 01 v.57 10-14     字体:

基金项目: 国家自然科学基金(编号:81704148);;天津市教委科研计划项目(自然科学)(编号:2017KJ149)

作者:王煜;赵岚;阚伯红;史慧妍;

关键词:神经干细胞;;神经退化性疾病;;胶质细胞;;分化

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.01.003

〔摘 要〕 目的 探究miR-9是否通过调控β-微管蛋白-Ⅲ(β-tubulinⅢ)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)影响神经干细胞(NSCs)的增殖。方法对健康孕鼠进行NSCs分离培养并将分离出的细胞均分为NO组(无转染NSCs细胞株)、NN组(NSCs转染miR-9-NC)、NM组(NSCs转染miR-9 mimics)、NI组(转染miR-9 inhibitor)。通过免疫荧光鉴定巢蛋白(Nestin),qRT-PCR法检测miR-9、β-tubulinⅢ、GFAP含量,MTT法检测NSCs增殖情况,流式细胞术检测NSCs凋亡情况,Western blot检测miR-9、β-tubulinⅢ、GFAP蛋白表达。结果Nestin在90%的NSCs中呈现阳性,且与细胞核共定位,提示NSCs分离成功。NM组NSCs中miR-9 mRNA表达量在四组中最高,说明转染成功。四组中NM组β-tubulinⅢmRNA、蛋白表达量最高,GFAP mRNA和蛋白表达量最低,NI组与之相反(P<0.05)。24 h后四组中NM组NSCs活性最强且呈现随时间延长而逐渐增强的趋势(P<0.05),NI组的细胞活性较其他三组减弱(P<0.05)。四组中NM组细胞凋亡率少于其他三组(P<0.05),NI组的细胞凋亡率较其他三组升高(P<0.05),NO组与NN组细胞上述指标差异无统计学意义。结论过表达miR-9通过促进β-tubulinⅢ表达、抑制GFAP表达,从而促进NSCs增殖。