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基于RhoA/ROCK通路研究硫化氢对星形胶质细胞低氧损伤的影响

安徽医科大学学报 2021 11 v.56 1707-1712     字体:

基金项目: 安徽高校自然科学研究项目(编号:KJ2020A0144);;国家自然科学基金(编号:81973510)

作者:张阳;丁延雨;文继月;陈志武;

关键词:硫化氢;;星形胶质细胞;;RhoA/ROCK通路;;低氧损伤

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.11.006

〔摘 要〕 目的探讨硫化氢(H_2S)对星形胶质细胞反应性增生和凋亡的影响及其RhoA/ROCK信号通路抑制机制。方法构建星形胶质细胞低氧培养(94%N_2-5%CO_2-1%_2)模型,分别给予硫氢化钠(NaHS)(50、100、200μmol/L)和ROCK抑制剂Fasudil(5μmol/L)预处理。低氧培养48 h后,用CCK-8法检测细胞活力,用分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,用钙离子荧光指示剂fluo-8检测细胞内Ca~(2+)浓度的变化,使用Western blot法检测细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Ras同源家族成员A(RhoA)、Rho蛋白激酶1(ROCK_1)和Rho蛋白激酶2(ROCK_2)蛋白的表达。结果 NaHS(100、200μmol/L)明显提高低氧培养星形胶质细胞的活力、降低培养上清液中LDH活性、减少细胞凋亡和细胞内Ca~(2+)超载,提示NaHS对星形胶质细胞低氧培养损伤的保护作用;ROCK抑制剂Fasudil也具有类似的保护作用,并且联合应用Fasudil和NaHS对星形胶质细胞的保护作用进一步增强;NaHS(100、200μmol/L)以及Fasudil均可抑制低氧损伤所致星形胶质细胞中GFAP、RhoA、ROCK_1和ROCK_2蛋白表达增高,联合应用Fasudil和NaHS对GFAP、RhoA、ROCK_1和ROCK_2蛋白表达的抑制作用更为明显。结论 H_2S对于星形胶质细胞的低氧损伤有明显地保护作用,其作用可能与抑制RhoA/ROCK通路的激活有关。