基金项目: 国家自然科学基金(编号:81673444、81703524)
作者:蒋吉;胡姗姗;魏伟;
关键词:血管紧张素Ⅱ2型受体;;CRISPR/Cas9;;基因敲除;;聚合酶链式反应;;琼脂糖凝胶电泳;;基因型鉴定
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.08.013
〔摘 要〕 目的利用CRISPR/Cas9技术构建血管紧张素Ⅱ2型受体(AngiotensinⅡtype 2 receptors, Agtr2)基因敲除(Agtr2~(-/-))小鼠,分析Agtr2~(-/-)小鼠的繁育和基因型。方法与江苏集萃药康公司联合设计执行CRISPR/Cas9技术,获得Agtr2~(-/-) F0代小鼠,通过聚合酶链式反应(PCR)对鼠尾基因型进行鉴定。F1代Agtr2~(-/-)小鼠由F0代Agtr2~(-/-)小鼠性成熟后与同窝野生型小鼠交配而得。PCR鉴定结果的可靠性则通过Western blot从蛋白水平上加以验证。结果利用CRISPR/Cas9技术成功构建了Agtr2~(-/-)小鼠并对所获小鼠进行繁育和基因型鉴定,得到了Agtr2~(+/+)、Agtr2~(+/-)、Agtr2~(-/-)3种基因型稳定的Agtr2基因小鼠。Western blot检测结果证实Agtr2~(-/-)小鼠心脏、脾脏、胸腺、肝脏及肾脏组织中几乎不表达Agtr2蛋白。结论成功构建了Agtr2~(-/-)小鼠模型,并通过可靠的鉴定方法和合适的繁育手段得到纯合Agtr2~(-/-)小鼠。