基金项目: 江苏省青年医学重点人才基金项目(编号:QNRC2016883);;无锡市医疗与公众健康技术创新应用项目(编号:N20192007)
作者:靳天慧;陈亮;刘叶红;盛瑛;宗刚军;
关键词:前蛋白转化酶枯草溶菌素9;;血管钙化;;血管内皮细胞
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.08.015
〔摘 要〕 目的探讨抑制前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对地塞米松联合L-抗坏血酸和β甘油磷酸诱导的人主动脉内皮细胞(HAEC)钙化的影响。方法使用不同浓度(0、10、30、50 mmol/L)β甘油磷酸+50μg/ml L-抗坏血酸+100 nmol/L地塞米松刺激HAEC,筛选出诱导细胞钙化的最佳浓度,并验证HAEC钙化时,PCSK9的mRNA和蛋白表达。采用小干扰RNA(siRNA)敲低HAEC中PCSK9的表达,采用相同条件诱导细胞钙化,检测敲低PCSK9后HAEC中PCSK9及主要钙化指标的表达变化。茜素红S染色观察细胞内的钙化沉积。结果 (1)当β甘油磷酸浓度为30 mmol/L时,HAEC中主要钙化指标骨形态发生蛋白(BMP) 2、BMP4和Runt相关转录因子2(RUNX2)的mR NA和蛋白表达水平达到峰值,诱导钙化效果最佳;(2)诱导HAEC钙化后细胞内PCSK9的mR NA和蛋白表达水平明显升高;(3)敲低细胞内PCSK9的表达能够抑制体外诱导的HAEC钙化,钙化相关基因和蛋白的表达降低,细胞内钙盐沉积明显减少。结论 PCSK9的表达与HAEC钙化水平相关,敲低PCSK9可抑制地塞米松联合抗坏血酸和β甘油磷酸诱导的HAEC钙化。