安徽医科大学学报
2021 05 v.56 814-819
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基金项目: 国家自然科学基金资助项目(编号：81202541、81973314);;安徽省杰出青年学者自然科学基金(编号：1808085J28);;安徽高校自然科学研究重点项目(编号：KJ2017A176);;安徽省高校优秀青年人才支持计划项目(编号：gxyqZD2017025)
作者：周正炜;郭派派;王曼曼;孙寒飞;王珍;邰宇;刘琪;张巧琳;吴华勋;汪庆童;魏伟;
关键词：大鼠乳鼠;;颌下腺成纤维细胞;;原代培养;;胰酶消化法;;波形蛋白
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.05.027
〔摘 要〕 探讨大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞体外分离及培养的方法。采用0.125%胰酶多次消化法收集新生SD大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞。高内涵细胞成像法检测细胞增殖能力,免疫荧光、Western blot和RT-PCR法检测波形蛋白表达水平,CD90标记成纤维细胞、鉴定细胞纯度。最新消化分离得到的细胞呈亮球形,轮廓清晰,单个散在或聚集成团分布,90 min后即有大量细胞贴壁,其中部分细胞已开始伸展。5～6 d可形成单层细胞,传代后的细胞呈长纺锤形或多边形。波形蛋白表达呈强阳性。传代3代的细胞培养体系中成纤维细胞约占87%。含5%FBS的DMEM/F12培养基培养24 h即可检测到细胞的大量增殖。胰酶消化法是获得大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞的有效方法。