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华蟾素调控PI3K/AKT通路逆转卵巢癌A2780/DDP细胞顺铂耐药的作用机制

安徽医科大学学报 2024 04 v.59 671-677+741     字体:

基金项目: 安徽省2021年重大疑难疾病(卵巢癌)中西医协同攻关项目(编号:皖中医药发展秘[2022]70号);安徽省第十三批“115”产业创新团队;

作者:舒美玲;吴悦;叶映泉;张爽爽;张梅

关键词:华蟾素;卵巢癌;顺铂耐药;逆转耐药;PI3K/AKT;上皮间质转化;作用机制;

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2024.04.018

〔摘 要〕 目的 研究华蟾素(CBG)对人卵巢癌细胞顺铂耐药的逆转作用和机制。方法 A2780细胞株及其顺铂耐药细胞株A2780/DDP是临床常见的卵巢癌细胞,故选择这两种细胞株作为研究对象。通过CCK-8法检测细胞活力,平板克隆和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测细胞的增殖能力,赫斯特染色(Hoechst)法观察细胞凋亡情况,细胞划痕实验和Transwell实验评估细胞的迁移和侵袭能力,Western blot和定量逆转录PCR(RT-qPCR)法检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路和上皮-间质转化(EMT)的相关蛋白和mRNA的表达差异。结果 与A2780细胞相比,A2780/DDP细胞的耐药指数分别约为5.636、5.864、5.695,采用CBG(2、4、6 mg/ml)处理A2780/DDP耐药细胞后,逆转耐药指数分别为1.617、2.570、3.461。CBG呈浓度依赖性地上调细胞凋亡水平、抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。Western blot结果显示:与A2780细胞相比,对照组(A2780/DDP)细胞中P-PI3K/PI3K和P-AKT/AKT的蛋白水平相对比值以及N钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、蜗牛蛋白(Snail)的蛋白表达更高,E钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达更低(tP-PI3K/PI3K=8.115,tP-AKT/AKT=17.62、tN-cadherin=6.126、tVimentin=4.001、tSnail=17.333、tE-cadherin=4.620,P<0.01);随着CBG剂量升高,耐药细胞中的P-PI3K、P-AKT、N-cadherin、Vimentin、Snail的蛋白表达水平降低,而E-cadherin的蛋白表达量增加(FP-PI3K=268.5、FP-AKT=190.5、FN-cadherin=24.02、FVimentin=57.65、FSnail=87.24、FE-cadherin=135.8,P<0.05)。RT-qPCR结果显示:随着CBG浓度增加,PI3K、AKT、N-cadherin、Vimentin、Snail的mRNA表达水平随之降低,相反E-cadherin的mRNA表达水平逐渐升高(FPI3K=101.1、FAKT=558.3、FN-cadherin=86.97、FVimentin=105.9、FSnail=85.71、FE-cadherin=80.96,P<0.01)。结论 CBG具有逆转卵巢癌A2780/DDP细胞株顺铂耐药的作用,其机制可能与CBG调控PI3K/AKT信号通路和抑制EMT发生有关。