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miR-486-5p靶向FOXO1抑制结肠癌干细胞干性的初步研究

安徽医科大学学报 2020 04 v.55 528-533     字体:

基金项目: 湖北省卫生和计划生育委员会科研项目(编号:MJ2017Y065)

作者:龚立刚;艾成思;王梦萍;

关键词:结肠癌;;CSCs;;miR-486-5p;;FOXO1;;干性

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.04.009

〔摘 要〕 目的研究miR-486-5p在结肠癌(CRC)细胞系和CRC干细胞(CSCs)中的表达水平,并探讨miR-486-5p对CRC CSCs干性的影响和对FOXO1的靶向调控作用。方法qRT-PCR检测miR-486-5p在CRC细胞系SW480、HCT116、SW620和HT29及正常结肠细胞系NCM460中的表达水平。培养HCT116细胞中的CSCs。Western blot检测Nanog、SOX2、OCT4干性标志蛋白及miR-486-5p在CSCs中的表达。经脂质体分别转染miR-486-5p mimic和对照(NC)48 h后,MTS检测CSCs增殖能力,Transwell实验检测CSCs转移能力,Boyden实验检测CSCs侵袭能力。遗传霉素(G418)筛选稳定过表达miR-486-5p的CSCs细胞,注射到BALB/c裸鼠皮下,观察miR-486-5p对CSCs体内致瘤能力的影响。经Targetscan 7. 1软件预测及双荧光素酶报道基因实验,验证miR-486-5p对FOXO1基因的靶向作用,qRT-PCR检测miR-486-5p对CSCs中FOXO1 mRNA表达影响。结果qRT-PCR结果显示miR-486-5p在CRC细胞系中的表达低于正常结肠细胞系(均P <0. 05)。OCT4、Nanog、SOX2干细胞标志物在CSCs中表达上调; miR-486-5p在CSCs中表达显著下降; miR-486-5p mimic后,CSCs细胞增殖、转移及侵袭能力均下降(均P <0. 05)。CSCsm iR-486-5p裸鼠成瘤能力降低(P<0. 05)。Target Scan7. 1预测软件和双荧光素酶报道基因实验证实FOXO1为miR-486-5p的靶基因,miR-486-5p mimic组FOXO1 mRNA的表达减少(P <0. 05)。结论 miR-486-5p在CRC细胞系和CSCs中均低表达,miR-486-5p能通过负调控FOXO1抑制CSCs的干性。