基金项目: 安徽高校自然科学研究项目(编号:KJ2019A0278);;高校优秀青年人才支持计划(编号:gxyqZD2019018);;安徽省转化医学研究院科研基金项目(编号:2017zhyx02)
作者:张鹏飞;张力;王辉;杨荷宇;梁朝朝;
关键词:肾癌;;Caki-1细胞株;;氧化锌纳米颗粒;;自噬
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.03.001
〔摘 要〕 目的探讨氧化锌纳米颗粒(ZnO NPs)对肾透明细胞癌细胞Caki-1的杀伤效应及其与自噬的相关性。方法于96孔板内制备Caki-1单层细胞(2×10~3/孔),用不同浓度(1、5、10、15、20、25μg/ml)的ZnO NPs处理后或用15μg/ml ZnO NPs处理不同时间(6、12、24 h)后,噻唑兰(MTT)法检测ZnO NPs对Caki-1细胞的生长抑制作用。随后,用Western blot法检测不同处理组细胞自噬效应的变化,最后再次利用MTT法及Hoechst33342/PI染色法测定ZnO NPs与自噬抑制剂或增强剂共处理后细胞活力的改变。结果 ZnO NPs对Caki-1细胞具有剂量及时间依赖性的杀伤效应。且ZnO NPs亦可诱导剂量及时间依赖性的自噬效应。将ZnO NPs与自噬抑制剂渥曼青霉素(Wort)共处理后,微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ型(LC3-Ⅱ)蛋白的积累减少。ZnO NPs与自噬诱导剂海藻糖(Trehalose)共处理后,LC3-Ⅱ蛋白的积累增多。同时,将ZnO NPs与Wort或氯喹共处理后,细胞活力相较于ZnO NPs单独处理组有所回升;而将ZnO NPs与Trehalose联合处理细胞后,细胞活力进一步降低。结论 ZnO NPs对Caki-1细胞具有剂量及时间依赖性的杀伤效应;在Caki-1细胞中可诱导促死亡自噬效应,抑制自噬可降低ZnO NPs对细胞的杀伤作用,增强自噬可促进ZnO NPs对细胞的杀伤作用;ZnO NPs可促进自噬体的形成,而非抑制自噬底物的降解。