〔摘　要〕 目的 为了更有效地检测细胞DNA损伤，对彗星实验的影响因素进行优化并建立阳性对照。方法 以传统碱性彗星实验为基础，对制胶方法、凝胶浓度、琼脂糖溶剂、裂解时间、细胞密度和电泳电压加以优化。以过氧化氢(H2O2)作为DNA损伤诱导剂诱导HL-60细胞作为该实验的阳性对照。结果 优化后的实验结果显示，制胶方法由三步法进步为两步法，以PBS为琼脂糖溶剂，0.8%正常熔点琼脂糖制备底层胶，0.7%低熔点琼脂糖与细胞悬液混合作为第二层胶，制胶效果好，操作更简单省时，较好地解决了脱胶问题。裂解1 h, 1 V/cm电压电泳，获得了具有代表性的彗星图像，结果易于判读，能有效避免假阳性结果。并对不同浓度H2O2诱导的HL-60细胞DNA损伤情况进行比较，成功建立了彗星实验的阳性对照。结论 与传统方法相比，优化后的彗星实验方法成本更低，更简单、快速、准确，重复性也更好，能够快速检测细胞中的DNA损伤。