〔摘　要〕 目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞定向分化过程中的功能。方法在小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化过程中的三个不同阶段分别添加Wnt/β-catenin信号通路的激动剂CHIR99021;利用Western blot、qPCR以及免疫荧光等方法,检测胰岛细胞标志基因Pdx1、Ngn3、Pax4和Insulin1的表达情况;基于Tet-On表达调控系统,建立由小分子Doxcycline控制的β-catenin基因可诱导过表达胚胎干细胞系,在胰岛细胞形成的不同阶段进行诱导表达,观察其功能是否与CHIR99021类似;最后,利用慢病毒干扰系统,在干细胞中下调β-catenin的表达水平,观察其是否可以减弱CHIR99021在胰岛细胞形成过程中的功能。结果小鼠胚胎干细胞在三个不同时间段经过三种不同配方的溶液处理能够有效地分化成胰岛细胞。在胰岛细胞定向分化的早期和晚期阶段,添加CHIR99021和过表达β-catenin均可以提高胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞的分化效率,表现为Pdx1和Insulin 1的表达上调(P<0.01),而干扰β-catenin基因的表达则减弱了CHIR99021的功能(P<0.01)。结论在小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的特定阶段,激活Wnt/β-catenin信号通路能够促进胰岛细胞的形成,优化了目前胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的方案,为未来利用干细胞治疗糖尿病提供了有用线索。