安徽医科大学学报
2019 11 v.54 1729-1734
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基金项目: 国家自然科学基金(编号:81773294);;湖南省自然科学基金(编号:2019JJ20014);;湖南省研究生科研创新项目(编号:CX2018B637)
作者：胡芳琳;钟小林;陈亚军;钟警;
关键词：乳腺癌;;HMGA1;;细胞增殖;;质粒转染
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2019.11.014
〔摘 要〕 目的构建高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达载体及乳腺癌MCF7和T47D细胞HMGA1高表达稳定株,并检测HMGA1高表达对MCF7和T47D细胞增殖的影响。方法通过PCR扩增HMGA1基因编码框,将HMGA1编码框连接于GV219[pcDNA3.1(-)]载体,经测序确认后,将pcDNA3.1(-)/HMGA1分别转染至MCF7和T47D细胞中,再经遗传霉素(G418)筛选单克隆株并扩大培养。通过Western blot检测各稳定细胞株HMGA1的表达,从而筛选出HMGA1稳定高表达的细胞株。实验进一步采用MTT比色法和细胞克隆形成实验检测HMGA1高表达对细胞增殖能力的影响。结果成功构建pc DNA3. 1(-)/HMGA1载体;成功建立稳定高表达HMGA1的MCF7和T47D细胞株; MTT实验结果表明MCF7和T47D细胞HMGA1高表达稳定株增殖能力比对照组明显增强(P <0. 001);克隆形成实验结果显示HMGA1高表达稳定株克隆形成率明显高于对照组(P <0. 001)。结论 HMGA1稳定高表达可明显促进乳腺癌MCF7和T47D细胞的增殖。