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鼠源GFP-VNN1重组质粒的构建及其功能研究

安徽医科大学学报 2019 11 v.54 1717-1721     字体:

基金项目: 国家自然科学基金(编号:81770609)

作者:李琳;李俊;

关键词:重组人血管非炎性因子1基因;;绿色荧光蛋白;;RAW264.7细胞;;基因表达;;细胞因子;;细胞凋亡

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2019.11.011

〔摘 要〕 目的构建鼠源绿色荧光蛋白-重组人血管非炎性因子1基因(GFP-VNN1)重组质粒,并观察其对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞因子分泌及细胞凋亡的影响。方法从RAW264.7细胞中获得总RNA,逆转录得到cDNA,用HindⅢ和BamHⅠ限制性内切酶双酶切后连接至绿色荧光蛋白(GFP)载体上。表达载体经限制性内切酶酶切和DNA序列分析正确后转染至RAW264.7细胞中,ELISA试剂盒及Western blot法检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)分泌,流式细胞术检测细胞凋亡。结果阳性克隆经双酶切法鉴定可见VNN1基因片段,重组质粒GFP-VNN1可以显著促进细胞因子TNF-α和IL-6的分泌及RAW264.7细胞的凋亡。结论表明成功构建重组GFP-VNN1质粒,其能促进细胞因子分泌及细胞凋亡。