安徽医科大学学报
2019 10 v.54 1570-1573
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基金项目: 安徽省公益性技术应用研究联动计划项目(编号:15011d04043)
作者:刘浩波;刘涛;王亚雷;罗昭锋;
关键词:cell-SELEX;;核酸适配体;;胃癌;;转移;;靶标蛋白
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2019.10.015
〔摘 要〕 目的探索可以特异性识别高转移胃癌细胞(HGC-27)的核酸适配体LW-25的靶标蛋白。方法合成已知的可以特异性识别HGC-27而不识别无转移能力的胃腺癌细胞的LW-25。首先,通过胰蛋白酶消化细胞来确定核酸适配体结合的靶标类型是蛋白质,然后通过裂解细胞提取出蛋白质。用核酸适配体介导的亲和富集实验富集出LW-25所结合的蛋白,经电泳分离后,找到潜在靶标蛋白所在的差异条带。最后利用质谱技术分析差异条带内的蛋白质,通过分析比对质谱结果得到潜在的靶标蛋白。结果十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)找到差异条带,经质谱分析,不含POU结构域的八聚核苷酸结合蛋白(p54nrb/NONO)在核酸适配体LW-25样品组中量极高,在文库对照样品组中蛋白量很少,在琼脂糖凝胶珠样品组中几乎没有,因此判定NONO是最明显的差异蛋白。结论 NONO是LW-25潜在的靶标蛋白并很可能是引起胃癌转移的重要蛋白。