基金项目: 国家自然科学基金(编号:81772908、31702030、81201368);;安徽省高校自然科学研究项目(编号:KJ2017A203)
作者：洪翠丽;金振辉;朱亮亮;潘林鑫;耿慧武;刘晓颖;
关键词：CLIC1缺失突变体;;免疫荧光;;免疫共沉淀;;GST pulldown
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2018.11.008
〔摘 要〕 目的探究胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)的缺失突变体CLIC1(Δ49-51)在哺乳动物细胞中的表达、定位改变,及与Sedlin蛋白在体内、体外相互作用的影响。方法构建CLIC1的缺失突变体的真核表达质粒pc DNA3. 1-CLIC1(Δ49-51)-FLAG;免疫荧光观察CLIC1(Δ49-51)与Sedlin在COS7细胞中的共定位;在HEK 293T细胞中进行免疫共沉淀和GST pulldown实验,研究CLIC1(Δ49-51)与Sedlin的相互作用。结果 CLIC1(Δ49-51)在COS7细胞中主要定位于细胞质,小部分定位于细胞核。相对于野生型CLIC1的细胞核定位,缺失突变体的细胞内定位发生明显改变并且与Sedlin蛋白没有共定位。Western blot结果显示CLIC1(Δ49-51)能在HEK 293T细胞中有效表达;免疫共沉淀实验结果表明其与Sedlin在体内没有相互作用; GST pulldown结果表明其与Sedlin在体外没有相互作用。结论 CLIC1蛋白的第49~51位氨基酸序列KRR对CLIC1蛋白在细胞内的正确定位发挥重要作用;其缺失突变后影响了CLIC1在细胞内的定位、表达及CLIC1与Sedlin的相互作用。