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D896N突变型EGFR稳转细胞株的构建及其对吉非替尼敏感性的研究

安徽医科大学学报 2018 09 v.53 1327-1331     字体:

基金项目: 安徽省卫生计生委中医药科研课题(编号:2016zy29)

作者:潘婧;彭佳;潘跃银;

关键词:非小细胞肺癌;;EGFR突变;;稳定转染

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2018.09.002

〔摘 要〕 目的构建携带D896N突变型EGFR基因的重组质粒,转染Ba/F3细胞后对其的表达及对吉非替尼的敏感性进行研究。方法 PCR构建重组质粒MSCV-Tel-EGFR D896N,与2种辅助质粒MLV和VSVG共转染293T细胞包装产生慢病毒,对Ba/F3细胞进行转染。Puromycin筛选后,Western blot检测EGFR及p-EGFR的表达;撤除IL-3培养观察细胞是否正常增殖;Western blot检测并比较Ba/F3-Tel-EGFR L858R、Ba/F3-Tel-EGFR D896N对于吉非替尼的敏感性。结果酶切及测序验证重组质粒构建无误,Western blot检测转染后的Ba/F3细胞中EGFR及p-EGFR有表达,撤除IL-3后细胞无法正常增殖,吉非替尼作用后p-EGFR明显下降。结论成功构建了表达D896N突变型EGFR的Ba/F3细胞株,初步判断该位点并非驱动基因,但是对吉非替尼有一定敏感性。