基金项目: 国家自然科学基金(编号:81472448)
作者:汪慎燚;徐恰;阮昕;席浩;王鹏;陈曦;秦宜德;
关键词:RNA干扰;;人卵巢癌;;EEF1D;;DDP;;PGPIPN
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2018.06.002
〔摘 要〕 目的探讨RNA干扰真核生物翻译延长因子1δ(EEF1D)基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响。方法针对人EEF1D基因设计并筛选出下调基因表达效果最佳的siRNA,构建shRNA序列表达载体pLJM1-shRNA。通过慢病毒表达载体构建稳定转染pLJM1-shRNA-EEF1D的SKOV3、SKOV3/DDP细胞株。RT-PCR和Western blot检测稳定转染细胞株EEF1D基因的表达情况,MTT法测定PGPIPN、DDP、DDP/PGPIPN对稳定转染细胞株的增殖抑制率。结果成功构建重组慢病毒载体pLJM1-shRNA-EEF1D。RT-PCR和Western blot法均证实在SKOV3、SKOV3/DDP细胞中成功敲减EEF1D的表达。此外,MTT结果显示,与对照组和非特异性转染组相比,DDP/PGPIPN细胞的增殖均明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过敲减EEF1D基因表达可以明显增强人卵巢癌SKOV3/DDP细胞对DDP/PGPIPN的敏感性。