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内皮祖细胞条件培养基对脂肪干细胞成骨分化的影响

安徽医科大学学报 2018 05 v.53 727-734     字体:

基金项目: 国家自然科学基金(编号:81171173)

作者:曹乐;方晓;丁振飞;王涛;黄威;饶先亮;尹宗生;

关键词:脂肪间充质干细胞;;内皮祖细胞;;成骨分化

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2018.05.014

〔摘 要〕 目的探究SD大鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs)条件培养基(EPC-CM)对脂肪间充质干细胞(ADSCs)增殖和成骨分化能力的影响。方法体外分离、培养、扩增并鉴定SD大鼠ADSCs与EPCs。实验设置3个不同浓度的EPC-CM培养ADSCs,分别为对照组(不含EPC-CM)、50%EPC-CM组和100%EPC-CM组。采用CCK-8检测各组ADSCs的增殖活性;采用茜素红及碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红染色定性检测各组ADSCs的成骨分化能力;使用ALP及钙离子定量检测比较各组ADSCs成骨分化能力。结果免疫荧光检测提示ADSCs高表达表面特异性蛋白CD90,且经诱导可向成骨、成软骨和成脂方向分化。第2代EPCs高表达CD133和血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2);在铺有基质胶的96孔培养板中可形成管腔样结构,能够特异性地摄取乙酰化低密度脂蛋白和FITC-UEA-1。与对照组相比,50%EPCCM组和100%EPC-CM组ADSCs增殖活性均明显增加,且与EPC-CM浓度相关(P<0.05)。ALP定量检测培养14 d及21 d后50%EPC-CM组和100%EPC-CM组ADSCs的ALP活性均高于对照组(P<0.05)。培养14 d和21 d后,50%EPC-CM组和100%EPC-CM组钙离子含量均高于对照组(P<0.05)。结论 EPC-CM能够促进ADSCs的增殖与成骨分化能力,为阐明血管化细胞影响骨形成的机制提供了一定依据。