安徽医科大学学报
2018 03 v.53 352-358
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基金项目: 河南省高等学校重点科研项目(编号:15A180055);;新乡学院科技创新基金(编号:15ZC13);;新乡市科技攻关项目计划(编号:CXGG17015)
作者：张万方;孙寅玮;王孟慧;黄向瑜;樊松乐;徐磊;
关键词：泛素特异性蛋白酶2;;酶活性分析;;液相色谱-质谱联用技术
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2018.03.005
〔摘 要〕 目的为了探讨泛素特异性蛋白酶2a(USP2a)在肿瘤发生发展中的催化机制,构建USP2a C末端催化结构域原核表达质粒p ET28a-USP2a-C,分析USP2a C末端催化结构域的活性情况。方法利用荧光检测方法测定USP2a-C的酶促动力常数,并采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)分析USP2a的肽酶和异肽酶活性。结果结果表明获得了可溶性表达的USP2a-C融合蛋白,酶促动力学分析USP2a-C水解底物Ub-AMC的催化效率Kcat/Km=2.53×105mol/(L·s);LC-MS/MS分析结果表明USP2a-C能有效分解Di-Ub和Ub-V77两种不同性质的底物,并且两者之间的催化活性差异无统计学意义。结论获得了可溶性表达的USP2a-C蛋白,并且分析证明其具有完整的去泛素化酶的活性。