安徽医科大学学报
2017 11 v.52 1736-1738+1743
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基金项目: 国家自然科学基金(编号:81330081、81673444、81502123)
作者：汪扬;李亦凡;崔东倩;韩陈陈;马旸;魏伟;
关键词：G蛋白偶联受体激酶2;;脾脏组织;;免疫荧光
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2017.11.034
〔摘 要〕 建立了适合佐剂性关节炎大鼠脾脏组织G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)免疫荧光测定法。考察了免疫荧光测定的4个关键条件:(1)渗透剂Triton X-100的影响;(2)不同抗原修复液:柠檬酸缓冲液和p H 9.0乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液的影响;(3)5%胎牛血清封闭不同时间(20、30、40、50min)的影响;(4)不同一抗浓度(1∶50、1∶100、1∶200、1∶400、1∶500)的影响。实验结果显示,Triton X-100通透增强了抗原的表达;1∶100的一抗浓度对荧光信号强度最合适;封闭50 min能显著去除背景非特异性染色;柠檬酸缓冲液优于p H 9.0 EDTA缓冲液,提高了抗原表达。