安徽医科大学学报
2017 11 v.52 1726-1730
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基金项目: 国家自然科学基金(编号:81173075、81330081、81202541);;安徽省自然科学基金(编号:1208085QH146);;安徽医科大学青年拔尖人才支持计划(2013);;安徽医科大学第三批中青年学术技术带头人
作者：汪龙生;吴莉;胡珊珊;王瑞;张梅;韩陈陈;马旸;汪庆童;魏伟;
关键词：荧光共振能量转移;;c AMP;;G蛋白偶联受体;;荧光探针;;活细胞研究
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2017.11.032
〔摘 要〕 大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)转染pc DNA3-ICUE3质粒,用荧光共振能量转移(FRET)法观察前列腺素(PGE2)刺激下大鼠FLS环磷酸腺苷(c AMP)水平的实时变化,与放免法检测进行比较。FRET检测到FLS在PGE2刺激后1 min,c AMP升高14.93%,且不同批次实验差异较小;放免法检测到c AMP升高7.79%;FRET可检测到PGE2受体拮抗剂对c AMP产生的抑制,可观察到1 nmol/L PGE2促进c AMP产生,放免法检测PGE2产生效应最低浓度为0.1μmol/L。提示FRET法检测灵敏、重复性高,为G蛋白偶联受体信号通路研究的可靠技术手段。