基金项目: 国家自然科学基金(编号:31370983);;安徽省杰出青年科学基金(编号:1508085J08);;安徽省高校省级自然科学研究项目(编号:KJ2013Z204);;安徽省科技攻关计划项目(编号:1401045013、1604a0802082);;高校优秀青年人才支持计划重点项目(编号:gxyq ZD2016058)
作者：孙世林;周咏;张雷;李岩;张凯;何家才;邹多宏;王元银;
关键词：miR-210;;BMMSCs;;血管内皮生长因子;;基因转染;;HyStem-HP水凝胶
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2017.10.015
〔摘 要〕 目的通过体内与体外的手段验证miR-210能够有效的促进骨髓间充质干细胞(BMMSCs)血管内皮生长因子(VEGF)的表达和分泌。方法构建慢病毒载体,分别转染BMMSCs和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),Lenti-miR-210/BMMSCs和Lenti-Lac Z/BMMSCs培养第7天RT-PCR法检测VEGF表达,第14天Western blot法检测VEGF表达,PKH26荧光染色Lenti-miR-210/HUVEC和Lenti-Lac Z/HUVEC,Matrigel成管实验24 h,荧光显微镜观察成管效果;agomir-210和agomir-NC分别与BMMSCs复合Hy Stem-HP凝胶缓释系统裸鼠皮下注射7 d后取标本CD31免疫荧光染色。结果miR-210慢病毒载体转染BMMSCs,第7天RT-PCR和第14天Western blot法检测VEGF表达,明显高于Lenti-Lac Z/BMMSCs(P<0.05);Matrigel成管实验24 h结果显示:LentimiR-210/HUVEC组与Lenti-Lac Z/HUVEC组相比,端端接触明显且管状结构完整;agomir-210和agomir-NC与BMMSCs复合Hy Stem-HP凝胶缓释系统裸鼠皮下注射7 d后标本CD31免疫荧光染色结果:agomir-210组CD31阳性细胞含量明显高于agomir-NC组。结论通过体内与体外的检测,miR-210过表达能够有效促进BMMSCs血管内皮生长因子的表达和分泌。