基金项目: 安徽省重点研究与开发计划项目(编号:202004j070-20039);
作者:陈涤非,揭磊,黄启鸣,徐德祥,任晓非,洪汝涛
关键词:褪黑素;肝纤维化;肝星状细胞;自噬;PDGF-BB;
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.11.018
〔摘 要〕 目的 研究褪黑素(MEL)对血小板源性生长因子(PDGF-BB)诱导的肝星状细胞(HSCs)增殖的影响,并探索其与自噬水平调控的相关性。方法 HSC-T6共设置5组:对照组、模型组、MEL(低、中、高)处理组。培养24 h后细胞贴壁,换用无血清的DMEM培养基,使细胞同步化于G0期,再培养24 h后除对照组外各组加入PDGF-BB(终浓度为10 ng/ml),MEL处理组加入MEL(低剂量组为1 nmol/L,中剂量组1μmol/L,高剂量组为0.1 mmol/L),孵育48 h。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测MEL对PDGF-BB激活的HSCs增殖的影响。Western blot测定HSCs的微管相关蛋白1轻链3b(LC3b)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定HSCs LC3b mRNA、α-SMA mRNA表达水平。透射电镜观察HSCs的超微结构以了解自噬水平。结果 与对照组比较,PDGF-BB能诱导HSCs的增值(P<0.01)。与模型组比较,MEL能抑制PDGF-BB激活的HSCs增殖(P<0.01);与对照组比较,模型组LC3b、α-SMA蛋白表达明显增强(均P<0.05),LC3b mRNA、α-SMA mRNA表达明显增强(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,MEL能抑制这种作用(LC3b:P<0.05,P<0.01;α-SMA:P<0.01)。透射电镜显示,与对照组比较,模型组自噬溶酶体显著增加(P<0.05);与模型组比较,MEL处理组自噬溶酶体显著减少(P<0.01)。结论 HSCs的增殖可能与自噬激活有关,MEL抑制HSCs增殖可能与其下调自噬水平相关。