基金项目: 国家自然科学基金(编号:81370238);;北京市自然科学基金(编号:7142156)
作者:童珊珊;陈宇;张宁坤;高连如;程涛;王泽;雷洪涛;李春花;
关键词:人胚胎干细胞;;心脏祖细胞标志物;;定向心肌分化;;心肌细胞
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.12.005
〔摘 要〕 目的在人胚胎干细胞(h ESCs)定向心肌分化过程中,以中胚层阶段(d2)、心肌细胞起始分化阶段(d3)、心肌细胞后分化阶段(d7)为时间节点,探索APJ的表达特征。方法 h ESCs经单层培养后,应用化学成分明确的诱导分化培养基定向诱导h ESCs向心肌细胞分化,再于d2、d3、d7阶段分别进行细胞免疫荧光检测,共聚焦显微镜观察Brachyury T、mesp1、Nkx2.5与APJ的蛋白表达情况,实时荧光定量PCR法检测4种标志物mRNA的表达水平。结果诱导d7开始出现跳动的细胞,跳动细胞数量d7~d16逐渐增加,d16达高峰。细胞免疫荧光结果显示跳动的细胞心肌特异性标志物a-Actinin、c TNNT2表达阳性,并可见到明显的肌节及润盘结构;APJ在d2、d3、d7阶段分别与阶段特异性标志物Brachyury T、mesp1、Nkx2.5共表达。3个阶段中APJ mRNA呈持续性表达,在中胚层起始时表达最高,中胚层后表达逐渐降低。结论 APJ与代表h ESCs心肌分化过程中的阶段特异性标志物Brachyury T、mesp1、Nkx2.5共表达,证实APJ在人心肌细胞发育的整个过程中持续性表达。