安徽医科大学学报
2016 10 v.51 1547-1551
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基金项目: 国家自然科学基金(编号:81502123、81330081);;安徽省自然科学基金(编号:1308085QH130);;安徽省高等学校省级自然科学研究项目(编号:KJ2014A119)
作者：马旸;韩陈陈;李亦凡;汪扬;魏伟;
关键词：pIRES-EGFP-GRK2-S670A突变质粒;;重组质粒;;细胞转染
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.10.034
〔摘 要〕 GRK2-S670A突变体导入pI RES-EGFP真核表达载体,为寻找GRK2磷酸化GPCR的位点提供研究基础。利用PCR定点突变试剂盒,获得pG EM-T-GRK2-S670A,用Sal I/Apa I分别对pG EM-T-GRK2-S670A和EGFP-C3双酶切,构建EGFP-C3-GRK2-S670A,Sal I/BamH I双酶切EGFP-C3-GRK2-S670A和pI RES-EGFP,得到pI RES-EGFP-GRK2-S670A。将构建的质粒转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察和Western blot法检测融合蛋白的表达。酶切鉴定显示pI RES-EGFP-GRK2-S670A质粒条带大小符合,测序结果正确,成功构建pI RES-EGFP-GRK2-S670A真核表达质粒,转染HEK293细胞后可见融合蛋白表达,为后续研究奠定基础。