基金项目: 安徽省重点研究与开发计划项目(编号:202104j0702-0037);;安徽省高校优秀青年科研项目(编号:2023AH-030116);;安徽高校自然科学研究项目(编号:KJ2021A0313)
作者:江舜祥;涂彬;宋凯;何缓缓;陶辉;曹炜;
关键词:sFRP3;;心肌成纤维细胞;;心肌纤维化;;活化;;增殖
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2024.05.010
〔摘 要〕 目的 探讨Wnt信号通路调控剂分泌型卷曲相关蛋白3(sFRP3)在小鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法 购入1~3 d的小鼠乳鼠,行手术对心脏取材,消化后分离CFs进行培养。细胞贴壁生长后使用转化生长因子(TGF-β1)刺激构建CFs活化增殖模型;确认模型构建成功后分别向实验组和对照组细胞转染sFRP3过表达质粒和空载质粒24~48 h。通过Western blot、qRT-PCR的方法在分子层面对sFRP3、Periostin(POSTN)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达进行检测;使用MTT法、CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖能力的改变。结果在TGF-β1刺激构建的CFs活化增殖模型中,相较于对照组,模型组sFRP3蛋白及mRNA表达下降,活化增殖相关蛋白PCNA、POSTN和CollagenⅠ表达上调。另外,在质粒转染sFRP3过表达组的CFs中,PCNA、POSTN和CollagenⅠ蛋白及mRNA表达相较于空载组下降。MTT、CCK-8与EdU实验表明,质粒转染sFRP3过表达组的CFs增殖活性较空载组明显下降。结论 过表达sFRP3明显抑制CFs活化增殖,提示sFRP3可能是参与调控CFs活化增殖的关键基因。