基金项目: 国家自然科学基金资助项目(编号:81570295);;安徽省自然基金(编号:1308085M11117,1408085M11175)
作者:陈泽文;陶辉;周晓;施鹏;张家贵;宣海洋;占红英;石开虎;
关键词:microRNA-29a;;心肌成纤维细胞;;CollA1;;α-SMA;;quantitative real-time PCR
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.04.008
〔摘 要〕 目的探讨微小RNA-29a(miR-29a)inhibitors和mimics对大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响。方法取SD大鼠心肌组织,以组织块酶消化法分离细胞,通过差速贴壁离心法收集、培养SD大鼠心肌成纤维细胞。应用Lipofectamine~(TM)2000 Reagent分别向大鼠心肌成纤维细胞瞬时转染miR-29a inhibitors和miR-29a mimics 24 h和48 h后,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-29a、Ⅰ型胶原前胶原A1(Col1A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的RNA水平的表达,MTT法检测细胞增殖活性。结果与正常对照组和阴性对照组比较,在瞬时转染miR-29a inhibitors的心肌成纤维细胞中,miR-29a的表达水平下调;而在转染miR-29a mimics的心肌成纤维细胞中,miR-29a的表达水平上调。CoilA1在miR-29a inhibitors组中表达水平升高,而在miR-29a mimics组中则表达水平降低。α-SMA在miR-29a inhibitors组中表达水平升高,在miR-29a mimics组中则表达水平降低。瞬时转染miR-29a mimics 24、48 h后,与空白对照组和其阴性对照组相比较,心肌成纤维细胞活力明显下降;而瞬时转染miR-29a inhibitors 24、48 h后,心肌成纤维细胞活力则明显增强。结论 miR-29a mimics可明显抑制心肌成纤维细胞增殖活性,而miR-29a inhibitors则显著提高心肌成纤维细胞的增殖活性,提示心肌纤维化的形成可能与miR-29a表达下调有关,其潜在的分子作用机制有待进一步研究。