基金项目: 国家自然科学基金青年基金(编号:81201368)
作者:王二宁;陈丹丹;刘晓颖;范礼斌;
关键词:C3;;转染;;基因表达;;定位
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2015.11.001
〔摘 要〕 目的研究补体成分C3及其缺失突变体C3(1-840)、C3(824-1663)在真核细胞内的表达及与氯离子通道蛋白(CLIC1)的共定位。方法构建pc DNA3.1-C3-FLAG、pc DNA3.1-C3(1-840)-FLAG、pc DNA3.1-C3(824-1663)-FLAG三个真核表达质粒(缺失突变体根据C3的结构域及其裂解断裂位置设计),并分别转染至HEK 293T细胞中,Western blot检测表达情况;上述质粒分别瞬时单转至COS7细胞和分别与GFP-CLIC1共转至COS7细胞内,观察共定位情况。结果成功构建带FLAG标签的C3基因及其两个缺失突变体[C3(1-840)、C3(824-1663)]的真核表达载体,Western blot结果显示它们在HEK 293T细胞中均能成功表达;免疫荧光显示它们在COS7细胞中均主要分布于细胞质,且三个真核表达载体中只有C3(824-1663)与CLIC1有共定位。结论补体C3及其缺失突变体C3(1-840)和C3(824-1663)在HEK 293T、COS7细胞中均能高效表达,且主要分布在细胞质内,C3(824-1663)与CLIC1蛋白有共定位。