基金项目: 国家自然科学基金(编号:81471983,81171606);;安徽省高校省级自然科学研究项目(编号:KJ2014A106)
作者:谢园园;徐元宏;闻慧琴;王书书;李源玲;储德勇;沈继龙;
关键词:ROP16基因;;RAW264.7;;慢病毒感染
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2015.10.001
〔摘 要〕 目的比较目前常用的5种基因导入技术将弓形虫棒状体ROP16基因导入RAW264.7,选择合适的方法提高转染效率。方法以绿色荧光蛋白p EGFP-ROP16融合表达构建质粒,采用Lipofectamine3000、Attractene、FugeneHD转染试剂以及电穿孔转染和慢病毒载体感染RAW264.7,利用荧光显微镜和流式细胞仪观察目的基因的表达、细胞生长状态并分析转染效率,从而确定最佳的基因导入途径。结果上述质粒载体对RAW264.7的转染效率依次为电转法>FugeneHD>Lipofectamine3000>Attractene。但是电转法转染后细胞死亡率较高,细胞贴壁不牢或死亡;而慢病毒感染效率可达61.2%,细胞生长状态佳,显著优于质粒载体(P<0.05)。慢病毒组显著优于4个质粒组(P<0.05)。结论慢病毒感染可将弓形虫棒状体ROP16成功转入RAW264.7,具有较高的转染效率,效果显著优于质粒载体,目的基因在细胞内获得高效表达。为弓形虫ROP16的功能研究提供了重要基础。