基金项目: 国家自然科学基金(编号:30872253);;安徽省科技厅科技攻关项目(编号:08010302179);;校企合作实践教育基地(编号:2012sjjd014)
作者:伊兴旭;陈敬贤;甘霖;王明丽;
关键词:水痘-带状疱疹病毒;;糖蛋白E;;转染;;真核稳定表达;;血清学试验
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2015.03.001
〔摘 要〕 目的真核细胞稳定表达水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(g E)的胞外域基因,应用g E抗原建立VZV感染的血清学试验来评价VZV疫苗的免疫效果。方法构建含有VZV g E胞外域基因的真核表达质粒p CDNA3.1-g E,测序后脂质体转染COS-7细胞,经G418筛选出稳定表达VZV g E的细胞株。采用RT-PCR法检测VZV g E的mRNA,Western blot和间接免疫荧光法检测g E的免疫反应性,表达产物经Ni2+-NTA柱纯化后包被ELISA板,对127份0~10岁正常儿童血清中VZV-Ig G抗体水平进行检测。结果成功筛选出能够稳定表达VZV g E胞外域基因的COS-7细胞株,RT-PCR检测到g E的mRNA,经Western blot和间接免疫荧光鉴定,g E具有明显的免疫反应性,COS-7细胞株和其培养上清液中均有g E融合蛋白,表达量约为0.632 mg/ml,纯度约为90%。ELISA实验检测了127份0~10岁儿童血清中VZV-Ig G抗体,总阳性率为81.89%,特异度和灵敏度分别为93.75%和88.24%。结论本实验获得稳定高效表达VZV g E胞外域基因的COS-7细胞株,建立的ELISA血清学检测方法有助于VZV感染的流行病学研究和对易感人群VZV感染的诊断和预防。