安徽医科大学学报
2014 10 v.49 1382-1386
字体：大 中 小
基金项目: 国家自然科学基金青年基金(编号:81201368);;安徽省自然科学基金项目(编号:11040606M170、11040606M164);;安徽省教育厅自然科学重点科研项目(编号:KJ2010A187)
作者：赵健;耿慧武;乔正;李春雨;李克娟;刘晓颖;范礼斌;
关键词：GTFIIF2;;基因表达;;蛋白定位;;BL21
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2014.10.008
〔摘 要〕 目的构建不同标签的人通用转录因子IIF多肽2(GTFIIF2)表达载体,观察其细胞内的表达和定位。方法设计GTFIIF2的引物,以全长cDNA序列为模板,利用聚合酶链式反应技术扩增GTFIIF2全长序列,构建pcDNA3.1-FLAG-GTFIIF2和pCDGFP-GTFIIF2质粒,利用Western blot法和免疫荧光法检测其在细胞表达与定位;构建GST-GTFIIF2质粒,转化到BL21菌株,用IPTG诱导剂诱导融合蛋白表达,用SDS-PAGE分析诱导表达情况。结果免疫荧光法检测GTFIIF2蛋白集中分布在COS7细胞核中,在细胞质没有分布;pcDNA3.1-FLAG-GTFIIF2和pCDGFP-GTFIIF2质粒能够在HEK293T细胞中有效表达;GST-GTFIIF2在BL21菌株中很好的诱导表达。结论 GTFIIF2在COS7细胞、HEK293T细胞和BL21感受态细胞中能有效表达,为更好地了解GTFIIF2蛋白在细胞内的功能提供一定的研究基础。