基金项目: 江苏省高等学校基础科学研究面上省资助项目(编号:22KJB320024); 徐州市重点研发计划项目(编号:KC22218);
作者:邹雨希,孙晶,孙玉,索溪,周文凯,杨建光,刘岩
关键词:Lin28基因;哺乳动物雷帕霉素靶蛋白;人牙髓干细胞;增殖;成骨分化;
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.09.012
〔摘 要〕 目的 研究Lin28过表达通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖和成骨分化的影响。方法 通过慢病毒介导稳定转染Lin28基因到hDPSCs中,qRT-PCR检测Lin28相对表达量。CCK-8法检测Lin28过表达对细胞增殖活性的影响;qRT-PCR法检测成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨桥素(OPN)和骨钙素(OCN)的mRNA相对表达水平;Western blot法检测ALP和OPN的蛋白表达水平;茜素红染色检测细胞矿化能力。结果 与对照组比较,转染组增殖能力增强(P<0.05);转染组ALP、OPN、OCN mRNA及蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05);茜素红染色结果显示转染组形成的矿化结节大小与数目均显著低于空载体组(P<0.05)。加入mTOR抑制剂雷帕霉素(rapamycin)后,ALP和OPN mRNA表达水平降低(P<0.05)。过表达Lin28的同时加入rapamycin,相比对照组LV-Lin28组,OPN和OCN的表达增强(P<0.05)。结论 Lin28过表达可能部分通过mTOR信号通路抑制成骨分化。