安徽医科大学学报
2014 09 v.49 1202-1205
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基金项目: 安徽省教育厅自然科学重点科研项目(编号:KJ2010A187);;国家自然科学基金青年基金(编号:81201368);;安徽省自然科学基金(编号:11040606M170、11040606M164);;安徽医科大学博士基金(编号:XJ201009)
作者：李春雨;潘林鑫;刘晓颖;范礼斌;
关键词：CLIC3;;细胞定位;;蛋白表达
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2014.09.004
〔摘 要〕 目的研究人类胞内氯离子通道蛋白3(CLIC3)在真核细胞中的定位和表达,及其GST融合蛋白在原核细胞中的表达。方法以含人CLIC3的全长cDNA序列的质粒为模板,PCR扩增CLIC3片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-CLIC3-FLAG,检测其定位及表达;构建原核表达载体pGEX-5X-3-CLIC3,转化到大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导融合蛋白GST-CLIC3表达。结果细胞免疫荧光结果表明CLIC3在COS7细胞质和细胞核中均有分布;Western blot结果显示CLIC3在HEK-293T细胞中能有效表达;考马斯亮蓝染色结果表明融合蛋白GST-CLIC3在BL21菌株中能有效表达。结论人类的CLIC3蛋白COS7、HEK-293T及大肠杆菌BL21菌株均能有效表达,为进一步了解CLIC3的功能奠定了一定的基础。