基金项目: 国家自然科学基金(编号:81373421);;安徽省自然科学基金(编号:1208085MC53)
作者:赵欢;陈晓宇;姬飞虹;王奎锋;王志成;
关键词:阿尔茨海默病;;β淀粉样蛋白;;自噬;;微管关联蛋白轻链3
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2014.07.012
〔摘 要〕 目的探讨中药远志提取物(PTE)清除β淀粉样蛋白(Aβ)的途径及其可能的信号通路。方法采用MTT法观察不同浓度(100、40、20、10、5、0μg/ml)的PTE对神经细胞株(SH-SY5Y)的毒性作用。ELISA法检测PTE对转染过表达淀粉样前体蛋白(APP)和β分泌酶(BACE1)的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞培养液中Aβ水平的影响。单丹磺酰尸胺(MDC)染色检测PTE处理后的神经细胞内自噬小体的变化。Western blot检测微管关联蛋白轻链3(LC3)的表达水平,以及mTOR、p70s6k、Raptor、Akt、AMPK等蛋白的磷酸化水平。结果 MTT结果显示PTE对神经细胞活力没有影响(P>0.05)。CHO-APP/BACE1经药物处理后,Aβ分泌水平明显降低,并呈浓度依赖性。荧光显微镜下观察药物处理组细胞自噬增强,另外,自噬标志物蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平升高。结论 PTE通过增强AMPK/Raptor通路,抑制mTOR和p70s6k的磷酸化,诱导自噬发生,使细胞清除Aβ的能力增强,减少Aβ的分泌。