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鼠源pEGFP-C2-NLRC5重组质粒的构建及其表达

安徽医科大学学报 2014 02 v.49 145-148     字体:

基金项目: 国家自然科学基金(编号:81273526、81072686)

作者:李琳;彭云云;黄成;徐涛;李俊;

关键词:NLRC5;;pEGFP-C2;;RAW264.7;;基因表达;;蛋白表达

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2014.02.003

〔摘 要〕 目的构建鼠源pEGFP-C2-NLRC5表达质粒,并观察其在RAW264.7细胞中的表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中获得NLRC5基因的cDNA,用EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶双酶切后连接至pEGFP-C2载体上。表达载体经PCR、限制性内切酶酶切和DNA序列分析正确后转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR法鉴定其转录,Western blot法分析其蛋白表达。结果进行双酶切鉴定该质粒可见NLRC5DNA片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法可检测到NLRC5基因的转录,Western blot法可检测到NLRC5蛋白表达。结论成功构建重组pEGFP-C2-NLRC5表达载体,NLRC5蛋白可与绿色荧光蛋白在RAW264.7细胞中融合表达。