基金项目: 安徽省教育厅自然科学重点科研项目(编号:KJ2010A187);; 国家自然科学基金青年基金(编号:81201368);; 安徽省自然科学基金(编号:11040606M170、11040606M164);; 安徽医科大学博士科研基金(编号:XJ201009)
作者:潘林鑫;李新颖;徐南;李克娟;乔正;耿慧武;刘晓颖;范礼斌;
关键词:RB1;;转染;;基因表达;;细胞定位
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.08.001
〔摘 要〕 目的研究人RB1及其缺失突变体蛋白在细胞内的表达与定位。方法以含人RB1全长cDNA序列的质粒为模板,通过PCR方法分别扩增出RB1全长及其三段缺失突变体序列,然后分别构建其表达载体,利用Western blot法和免疫荧光法检测其在细胞株中的表达与定位。结果成功构建了pCDNA3.1-FLAG-RB1及其缺失突变体的表达载体,Western blot法结果证明其在细胞中都能有效地表达,免疫荧光的结果显示了RB1主要分布在细胞核,但其缺失突变体在细胞质中也有分布。结论人RB1在HEK 293T、COS7细胞中均有表达,且主要分布在细胞核内,其缺失突变体在胞质中也有分布,这为进一步了解人RB1的功能提供了一定的基础。