安徽医科大学学报
2013 06 v.48 583-586
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基金项目: 北京市自然科学基金(编号:7112107)
作者：房华丽;王琴;罗森;高翔;屠伟;田仁茂;刘雄;李涛;王慧;
关键词：肠道病毒71型;;柯萨奇B3病毒;;外壳蛋白VP1;;融合蛋白
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.06.001
〔摘 要〕 目的构建pET-22b-ECVP1表达载体,在大肠杆菌中诱导表达肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇B3型(CB3)病毒VP1融合蛋白(ECVP1),并鉴定其抗原性。方法利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分别从EV71与CB3病毒基因组中扩增得到外壳蛋白VP1基因,经重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法拼接构建重组融合蛋白基因(ecvp1),将该片段连接到pET-22b表达载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白,经Western blot鉴定其抗原性。结果pET-22b-ECVP1表达载体构建成功,融合蛋白相对分子量约为65 ku,Western blot分析表明,该融合蛋白能被抗EV71及抗CB3抗体特异识别。结论成功构建pET-22b-ECVP1表达质粒并诱导ECVP1融合蛋白表达,且融合蛋白具有良好的抗原性。