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稳定沉默Raptor表达的前列腺癌DU145细胞株的构建

安徽医科大学学报 2013 04 v.48 346-348     字体:

基金项目: 教育部博士点基金(编号:20113420110003);; 安徽省自然科学基金(编号:1208085MH138)

作者:潘腾飞;陈先国;梁朝朝;

关键词:shRNA;;Raptor;;前列腺癌;;DU145

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.04.004

〔摘 要〕 目的应用RNA干扰技术降低前列腺癌DU145细胞株Raptor基因表达水平,并建立稳定转染细胞株。方法针对Raptor基因设计合成siRNA,鉴定、测序正确后转染293T细胞观察基因表达情况;构建Raptor-shRNA慢病毒载体;进行Raptor-shRNA慢病毒包装及滴度测定;筛选稳定表达Raptor-shRNA的前列腺癌DU145细胞株;Western blot检测稳定转染细胞中的Raptor表达水平。结果 Raptor-shR-NA成功转染前列腺癌DU145细胞后,通过嘌呤霉素筛选,获得了Raptor基因沉默的DU145细胞株,Western blot检测证实该细胞株的Raptor表达水平明显低于对照组(P<0.01)。结论成功构建稳定沉默Raptor表达的前列腺癌DU145细胞株,为后续研究奠定了基础。